在自動低壓液相色譜方法開發(fā)過程中，采用等度洗脫時，先洗脫組分的色譜峰峰寬較窄，后洗脫組分的色譜峰峰寬較寬；而梯度洗脫方式，則具有分析時間短(特別是對于樣品組分復雜的情況來說)，在梯度范圍內(nèi)各色譜峰的峰寬近乎一致等特點。
在化學發(fā)展中,化合物性能與結(jié)構(gòu)的確定有著重要的歷史地位,尤其是有機、高分子化合物結(jié)構(gòu)的確定更是影響著化學發(fā)展的進程,所以說,液相色譜也有著同樣重要的歷史意義。液相色譜的出現(xiàn)、發(fā)展和過程直接影響著有機、高分子化合物的分離和分析,從而推動了化學學科的發(fā)展。
自動低壓液相色譜由輸出泵、進樣裝置、色譜柱 、梯度沖洗裝置、檢測器及數(shù)據(jù)處理和微機控制單元組成。輸出泵的功能是將沖洗劑在高壓下連續(xù)不斷地送入柱系統(tǒng)，使混合物試樣在色譜中完成分離過程。常用的進樣方式有3種：注射器隔膜進樣、閥進樣和自動進樣器進樣。自動低壓液相色譜的功能是將混合物中各組分分離。梯度沖洗又稱溶劑程序，通過連續(xù)改變沖洗劑的組成，改善復雜樣品的分離度，縮短分析周期和改善峰形，其功能類似于氣相色譜中的程序升溫。檢測器的功能是將從色譜柱中流出的已經(jīng)分離的組分顯示出來或轉(zhuǎn)換為相應(yīng)的電信號，自動低壓液相色譜主要有紫外吸收檢測器、熒光檢測器、電化學檢測器和折光示差檢測器，其中以紫外吸收檢測器使用zui廣?，F(xiàn)代化的儀器都配有計算機，以實現(xiàn)自動處理數(shù)據(jù)、繪圖和打印分析報告。
基質(zhì)或者樣品組分比較復雜時，自動低壓液相色譜zui常用的操作模式，而主要在梯度洗脫中出現(xiàn)的鬼峰是特別讓人頭疼的。有可能由于來源排查不清以及解決方案不到位而導致原來的方法在實際的應(yīng)用與轉(zhuǎn)移過程中出現(xiàn)問題，甚至面臨重新開發(fā)方法的尷尬境地。鬼峰意即來源不清，不可指認，時有時無，對目標峰或者樣品純度測試產(chǎn)生干擾作用的峰，即為典型的鬼峰，一般來講，鬼峰的出現(xiàn)與色譜柱無關(guān)(當然，梯度洗脫時，梯度設(shè)置不合適的情況除外)。
自動低壓液相色譜對于含量或者純度檢測方法而言，在主峰位置或附近出現(xiàn)鬼峰的話，影響到方法的專屬性以及檢測結(jié)果準確性。特別地，對于藥物制劑或者API的純度測試來說，自動低壓液相色譜要求對降解產(chǎn)生的雜質(zhì)之外的雜質(zhì)來源做出較詳細的說明(如反應(yīng)副產(chǎn)物或者反應(yīng)原料帶入等)。鬼峰的出現(xiàn)，可能增加此項工作的難度與工作量。
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